Молекул биологийн судалгааны аргууд, тэдгээрийн хэрэглээ

Молекул биологийн судалгааны арга , орчин үеийн анагаах ухаан, шүүх шинжлэх ухаан, болон биологийн чухал үүрэг гүйцэтгэдэг. ДНХ ба РНХ-ийн судалгаанд урьдчилгаа ачаар хүн организм геномын тодорхойлох хүчил гэх мэт холимогт хүссэн нуклейн хүчил хүлээн зөвшөөрч, нөлөөлөгч бодис судлах боломжтой

Молекул биологийн арга. Энэ юу вэ?

Буцах Give эрдэмтэд 70-80s нь учрыг тайлах анх хүний геномыг. Энэ үйл явдал генийн инженерийн болон молекулын биологийн хөгжилд түлхэц өгсөн юм. ДНХ ба РНХ-ийн шинж судалгаа энэ өвчний оношлогоо, судалгааны генийн зорилгоор эдгээр нуклейн хүчлийг хэрэглэх нь одоо боломжтой гэсэн үг юм.

ДНХ ба РНХ-ийн бэлтгэх

Молекул биологийн оношлогооны аргууд нь ихэвчлэн энэ: материалыг эхлэн шаарддаг нуклейн хүчил. Амьд организмын эсийн эдгээр бодисыг сонгохын тулд хэд хэдэн арга байдаг. Бүр өөрийн давуу болон сул талтай, мөн цэвэр хэлбэрээр нуклейн хүчлийг тусгаарлав аргыг сонгох үед энэ нь авч үзэх хэрэгтэй.

Marmur өөр ДНХ-ийн 1. Бэлтгэл. арга, архи бодисын холимог эмчлэх бүрддэг цэвэр ДНХ үр дүнд тунадас. Энэ аргын сул тал нь идэмхий бодис, фенол ба хлороформын хэрэглээ юм.

өсөлтийн дээр ДНХ-ийн 2. Тусгаарлах. Энд ашиглаж байгаа гол бодис - guanidine thiocyanate (GuSCN) юм. Энэ нь хуримтлал дэмжиж deoxyribonucleic хүчил мэргэшсэн ёроолд, үүнээс хойш энэ нь дараа нь тусгай буферт аргаар цуглуулж болно байна. Гэсэн хэдий ч GuSCN - TCP нь дарангуйлагч бөгөөд энэ нь ч бага хэсэг нь полимеразын гинжин урвал, нуклейн хүчил ажиллаж байх үед чухал ач холбогдолтой юм курс нөлөөлж болох ДНХ-д байршуулсан өгнө.

хольц 3. Хур тунадас. арга гэсэн молекулаас-д өөрсдөө dehoksiribonukleinovoy хүчил, бохирдлыг хадгалуулсан биш юм өмнөх хүмүүсийн ялгаатай. Үүнийг хийхийн тулд ион солилцогч ашигладаг. Сул тал нь бүх бодисууд нь шийдвэрлэх боломжтой юм.

4. Хэвлэл, илрүүлэх. Та ДНХ-ийн молекулын бүтэц, зарим статистик мэдээллийг авах шаардлагатай байгаа тухай үнэн зөв мэдээллийг байх шаардлага байхгүй үед энэ аргыг тохиолдолд ашиглаж байна. шалтгаан нь угаалгын нунтаг, ялангуяа alkalies харьцах үед нуклейн хүчлийн бүтэц гэмтэж болно гэсэн юм.

эрдэм шинжилгээний аргуудын ангилал

судалгааны мэдээлэл молекул-биологийн арга нь гурван үндсэн бүлэгт хувааж болно:

1. олшруулах (ферментийн олонхийг ашиглан). полимеразын гинжин урвал, оношлогооны аргууд нь олон чухал үүрэг гүйцэтгэдэг - Энэ ПГУ-ын орно.

2. Neamplifikatsionnye. аргуудын Энэ бүлэг нь нуклейн хүчлийн хольцын ажилтай шууд холбоотой юм. Жишээ нь газар дээрх Гибридизацийн, гэх мэт 3 төрлийн арчив байна

3. аргууд шалгалт, илрүүлэлтийн молекул, тодорхой ДНХ эсвэл РНХ шалгаж нь холбодог нь дохио хүлээн зөвшөөрөх дээр суурилсан. Жишээ нь - гибридизацийн систем Hybride барих систем уусмал (hc2).

молекул биологийн судалгаа шинжилгээний арга хэрэглэж болно фермент

Олон молекул оношлогооны техник ферментийн өргөн хүрээтэй ашиглах татан оролцуулах. Доорх нь хамгийн их ашиглагддаг:

1. хязгаарлах фермент - шаардлагатай хэсэгт ДНХ-ийн молекул "хасах".

2. ДНХ полимераза - нь давхар цасанд deoxyribonucleic хүчлийн молекул нэгтгэсэн.

3. Урвуу transcriptase (урвуу transcriptase) - нь РНХ-ийн загвар ДНХ-ийг нэгтгэж байсан.

4. ДНХ-ийн ligase - нуклеотидуудын хооронд phosphodiester бондын үүсэх үүрэгтэй.

5. exonuclease - deoxyribonucleic хүчлийн молекул төгсгөл хэсэгт нь нуклеотид устгана.

ПГУ-ын - ДНХ-ийн олшруулах үндсэн арга

Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) өргөн орчин үеийн молекул биологийн ашиглаж байна. Энэ арга нь, ямар нэг ДНХ-ийн молекул хуулбар (үгээр молекулын) нь маш олон тооны авч болно.

ПГУ-ын үндсэн чиг үүрэг:

- өвчний онош,

- ДНХ-ийн хэсгийг, генийн клон.

явуулах полимеразын гинжин урвал нь дараах элементүүдийг шаарддаг: эхний ДНХ-ийн молекул нь Дулаанд тэсвэртэй ДНХ полимераза (Taq эсвэл Pfu), deoxyribonucleotide фосфат (азот суурийн эх үүсвэр), праимерууд (2 праймер 1 ДНХ-ийн молекул) болон өөрөө орчны систем нь хийж болно бүх урвал.

Денатурацийг, доод annealing ба уртсалтын: ПГУ-ын гурван үе шаттайгаар бүрдэнэ.

1. денатураци. 94-95 градус Цельсийн proshodit температурт ДНХ-ийн хоёр гинжээр хооронд устөрөгчийн бонд эвдэж, мөн үр дүнд бид хоёр нэг цасанд молекулуудыг авах болно.

2. annealed праймер. 50-60 градусын температурт centigrade нөхөх төрлөөс хамааран нэг цасанд нуклейн хүчлийн молекул төгсгөлд нэгдэн праимерууд тохиолддог.

3. суналтыг. 72 градусын температурт нэгтгэсэн охин хоёр deoxyribonucleic хүчлийн молекул цасанд байна.

ДНХ-ийн дараалал

Молекул биологийн судалгааны аргууд нь ихэвчлэн deoxyribonucleic хүчлийн молекул дахь нуклеотидуудын дараалалд мэдлэгийг шаарддаг. тодорхойлохын тулд генетикийн кодыг дарааллыг. Ирээдүйн Молекул оношлогооны хүний дарааллаар тодорхойлоход хуримтлуулсан мэдлэг дээр суурилсан болно.

дараалал дараах төрөл:

• Максам-Гилбертийн хамт дараалал;
• Sanger дараалал;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe дараалал.